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本制品是基于Feinberg和Vogelstein发明的随机引物标记法而开发出来的即用型DNA探针标记试剂盒，得到的探针长度一般在200～400nt之间（如果模板长度在1kb以上），可以用于Southern杂交、Northern杂交、原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等。

标记过程由双链DNA热变性、随机引物与单链DNA结合、在Klenow DNA聚合酶催化下，引物的延伸合成DNA探针并掺入标记的核苷酸三步组成，标记过程可用下面的示意图表示。

• 简化了反应加样步骤，提高了标记反应的可重复性。
  
• 使用无外切活性的Klenow exo^- DNA聚合酶，已标记DNA探针不会被酶降解，探针产量更高。
  
• 快速，最快1小时即可完成标记反应。
  
• 得到的DNA探针比活性高（如果是同位素，可以达到10⁹ cpm/μg DNA）。
  
• 所需模版DNA量少，模板可以是线状或环状的、也可以是单链或双链的，但长度必须在100bp以上。

• 随机引物标记效率跟起始模板量和保温时间相关，杂交时需要探针DNA必须达到一定的浓度，其中探针/模板比越高，没有标记的模板DNA对杂交的竞争性抑制越低。用户在实验前可以根据下表选择合适的起始模板量和保温时间。
  

  起始模版DNA 用量(ng)	1小时后探针合成量 (探针模板比)	20小时后探针合成量 (探针模板比)
  10	80ng(8)	900ng(90)
  30	150ng(5)	1350ng(45)
  100	350ng(3.5)	1650ng(16.5)
  300	750ng(2.5)	2200ng(7.3)
  1000	1300ng(1.3)	2600ng(2.6)
  3000	1600ng(0.53)	2600ng(0.87)

• 本方法标记核苷酸掺入率极高，因此可以不经纯化直接使用。如果需要纯化，不要用酚抽提法纯化非同位素标记的DNA探针，因为这些标记分子（如生物素或地高辛等）疏水性强，能使标记的DNA进入疏水的有机相而丢失。只能选择乙醇直接沉淀或Sephadex G50过柱回收（需另购柱式探针纯化试剂盒）。对比活高的同位素标记探针，由于同位素其极其不稳定，因此应该立即使用，不要长久放置。

• 使用前将装有标记专用随机引物干粉的离心管短暂离心，在往管中加入10μL超纯水，得0.2μg/μL随机引物溶液，放冰上待用，没用完的此溶液需在-20℃保存。
  
• 在一干净的硅化的塑料离心管中加入下列成分：
  

  成分	用量
  模板DNA	50～150ng
  随机引物	2μL
  10×随机引物标记反应液	2μL
  超纯水	至15μL

  • 非同位素标记基团（如生物素和地高辛）疏水性强，易与塑料离心管表面非特异性结合，所以要硅化塑料离心管。模板DNA并非越多越好，否则没有标记的模板DNA在杂交时会竞争性地抑制标记DNA跟靶分子的杂交，反而降低杂交信号强度。
• 沸水浴10分钟，或在PCR仪上100℃加热10分钟彻底变性模板DNA，结束后需要立即放冰上待用。不能缓慢降温，否则变性的模板DNA单链又会杂交形成双链。
  
• 离心数秒使所有液体集中在管底，如果标记物为dTTP则加入除dTTP之外的三种核苷酸（dATP、dGTP、dCTP）各1μL（共3μL，浓度均为2mM），自备的dTTP/标记dUTP混合物1μL，最后加入1μL Klenow exo聚合酶。如果标记物为dCTP则加入除dCTP之外的三种核苷酸（dATP、dGTP、dTTP）各1μL，以此类推。
  
  • dTTP/标记dUTP混合物中dTTP和标记dUTP的总浓度必须达到2mM，dTTP与生物素标记dUTP或地高辛标记的dUTP的比例在65:35为最佳。但如果使用自备的其他标记核苷酸，如fluorescein、hydroxycoumarin、resorufin和aminoallyl标记的dUTP，则用户需要自己摸索其与dTTP之间的最佳比例，如果使用32P标记的dUTP，则比活最好为3000 Ci/mmol，浓度为好为10 μCi/μL，并且不需要加入dTTP。
• 轻柔吹打混匀。如有液滴沾在管壁上，离心数秒使所有液体集中在管底。
  
• 37℃保温1～20小时。反应结束后加热100℃ 5分钟使DNA聚合酶变性，同时使DNA探针变性成单链，然后立即冰上冷冻。不能缓慢降温，否则变性的模板DNA单链又会杂交形成双链。
  
• 变性后的标记反应液可以放-20℃长期保存，也可以直接加入到杂交反应液中进行杂交。如果电泳检测，标记产物将是弥散状态。